B、土壤微生物蛋白提�。篴、稱取2.0克上述預(yù)處理后的冷凍干燥樣品于10毫升預(yù)冷無(wú)菌離心管中,加6mL?細(xì)胞樣品蛋白提取液,渦旋混勻,每個(gè)樣品3次重復(fù)；所述的細(xì)胞樣品提取液配比為：100毫摩爾/升的三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液,1毫摩爾/升的二硫蘇糖醇,pH?7.8,100微升2.0微克/毫升的蛋白酶抑制劑；b、置于冰浴中用超聲波法徹底破碎細(xì)胞；20000×g,4℃下離心15分鐘,收集上清液,重復(fù)離心操作一次,所有的蛋白液均被收集,加入質(zhì)量比為80%的固體硫酸銨溶解度后,置于4℃振蕩充分混勻,20000×g,4℃下離心20分鐘,收集析出的蛋白,加50微升的1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶溶解液溶解后,獲得土壤微生物蛋白后,置于0℃保存待用；所述的1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶溶解液配比為：100毫摩爾/升pH?7.8的三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液和1毫摩爾/升的的二硫蘇糖醇。

　　C、土壤1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶酶活性測(cè)定：測(cè)定前將土壤微生物蛋白提取溶液置于30℃水浴中20~30分鐘以恢復(fù)酶活性,測(cè)定時(shí)環(huán)境溫度保持30℃,每個(gè)樣品酶活性測(cè)定三次,同時(shí)做兩個(gè)陰性對(duì)照,分別為無(wú)反應(yīng)底物1,5?二磷酸核酮糖對(duì)照和熱變性細(xì)胞蛋白提取物對(duì)照,1,5–二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性以二磷酸核酮糖羧化酶的酶活力大小來(lái)表示；a、將配制好的反應(yīng)體系搖勻,倒入比色杯內(nèi),以蒸餾水為空白,在紫外分光光度計(jì)上340?nm處反應(yīng)體系的吸光度作為零點(diǎn)值,將50微升1,5–二磷酸核酮糖加于比色杯內(nèi),并計(jì)時(shí),每隔30秒測(cè)一次吸光度,共測(cè)3分鐘,以計(jì)時(shí)起到第1分鐘內(nèi)吸光度下降的絕對(duì)值計(jì)算酶活力；b、不加1,5?二磷酸核酮糖的對(duì)照,對(duì)照的反應(yīng)體系與上述酶反應(yīng)體系完全相同,不同之處只是把酶提取液放在最后加,加后計(jì)時(shí)并測(cè)定此反應(yīng)體系在340nm處的吸光度,記錄前1分鐘內(nèi)吸光度的變化量,計(jì)算酶活力時(shí)應(yīng)減去這一變化量；c、二磷酸核酮糖羧化酶的酶活力的計(jì)算：nmol?CO2?kg?1(?土壤)?min?1＝ΔA×N×C?/(6.22×2dΔt)式中：ΔA－反應(yīng)最初1min內(nèi)340nm處吸光度變化的絕對(duì)值；N－稀釋倍數(shù)；C－換算系數(shù)；6.22－每微摩爾的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在340?nm處的吸光系數(shù)；2－每固定1摩爾CO2有2摩爾的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸被氧化；d－比色光程；kg?1－每千克預(yù)處理后土樣凍干粉；Δt－測(cè)定時(shí)間為1分鐘。

　　所謂固碳也叫碳封存，指的是增加除大氣之外的碳庫(kù)的碳含量的措施，包括物理固碳和生物固碳。物理固碳是將二氧化碳長(zhǎng)期儲(chǔ)存在開采過(guò)的油氣井、煤層和深海里。植物通過(guò)光合作用可以將大氣中的二氧化碳轉(zhuǎn)化為碳水化合物，并以有機(jī)碳的形式固定在植物體內(nèi)或土壤中。

　　生物固碳就是利用植物的光合作用，提高生態(tài)系統(tǒng)的碳吸收和儲(chǔ)存能力，從而減少二氧化碳在大氣中的濃度，減緩全球變暖趨勢(shì)。

　　固碳，是指增加除大氣之外的碳庫(kù)碳含量的措施。包括物理固碳和生物固碳。物理固碳是將二氧化碳長(zhǎng)期儲(chǔ)存在開采過(guò)的油氣井、煤層和深海里。生物固碳是將無(wú)機(jī)碳即大氣中的二氧化碳轉(zhuǎn)化為有機(jī)碳即碳水化合物，固定在植物體內(nèi)或土壤中。

　　常見的固碳方法有兩種：

　　光合作用：如各種綠色植物和光合自養(yǎng)微生物（如藍(lán)藻等）；

　　化能合成作用：如硝化細(xì)菌利用氧化氨合成有機(jī)物等。

　　生物固碳提高了生態(tài)系統(tǒng)的碳吸收和儲(chǔ)存能力，減少了二氧化碳在大氣中的濃度。